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Vb12的制备菌种 一）菌种制备 1：将保存在乳酸杆菌琼脂培养基上的莱士曼氏乳酸杆菌接种到新的培养基上，培养后再转接一次，然后转接到乳酸杆菌肉汤培养基中． 2：将培养液以2000r/min,离心2-3min，倒出上清夜．加入10毫升生理盐水，摇匀，再离心2－3分钟，如此清晰3-4次,吸取0.4毫升该菌液于10毫升生理盐水中. 3:用分光光度计,以生理盐水做空白,于550nm波长下检测，菌悬液的透光率，此时应在60－80％之间． 二)标准液的制备 1:精确称取VB12标准品,用体积分数为25%的乙醇溶液定溶,浓度为100ng/ml 2:用同样的乙醇将10毫升上述标准储备液定溶到1000毫升 3:将上述中间储备液吸两个5毫升,用蒸馏水分别定溶到250毫升和500毫升,分别为高浓度标准工作液和低浓度标准工作液. 三)操作 1:无水磷酸氢二钠1.3克,无水偏重亚硫酸钠1.0克,柠檬酸1.2克,100毫升蒸馏水定蓉. 2:称一定量的样品(VB12的含量在50-100ng），用10毫升上述溶液混合,再加150毫升蒸馏水,于121度水解10分钟,冷后调PH到4.5,再用蒸馏水稀释到浓度为VB12在0.01-0.02ng/ml 3:按下面顺序加入蒸馏水,标准溶液,VB12测定用培养基于培养管中,一式三分用来做标准曲线 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 蒸馏水 5 5 4 3 2 1 0 2 1 0 标准溶液 0 0 1 2 3 4 5 3 4 5 培养基 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 (试管3-7中加的是低浓度标准溶液,8-10中加的是高浓度的标准溶液) 4:按下列顺序加蒸馏水.样品溶液.VB12测定用培养基于培养管中,一式三份用来做测定液 试管号 1 2 3 4 蒸馏水 4 3 2 1 样品 1 2 3 4 培养基 5 5 5 5 5:接种;将上面所有的试管于121度灭菌5分钟,后迅速冷却将三).2中的菌悬液用毛细滴管向上述试管中个加1滴,标准曲线的1号管除外,摇匀,37度培养19-20小时. 结果VB12的含量:x/m*F/1000*100 x为曲线中查的样品中VB12的平均含量ng F稀释因子 m样品的质量 休 闲 居 编 辑 >>>>>>>>休闲养生网回答： 好深奥啊！看不懂~ |