影响ELISA检测乙型肝炎血淡学指标的因素
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  发布时间：2007-08-19 01:11:23

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乙型肝炎血清标志物的检测对乙型肝炎的诊治、预防和流行病学调查都有重要意义，但是在实际工作中我们发现该法受诸多因素的影响。本人翻阅有关文献报道，现就这方面的问题简要综述。
一、假阳性
1、溶血对乙型肝炎表面抗原的影响，我科采用对比观察的方法随机检验了113名肝功查体者，对比溶血前、后HbsAg的阳性率，结果发现溶血后阳性率比溶血前提高了22.13%。溶血血清具有过氧化酶活性，其作用效应与辣根过氧化物酶（HRP）类似，能与预包被抗体（Ab）结合，一步法洗涤步骤往往难从完全洗脱，残留的过氧化酶催化底物四甲基联苯胺（TMB）产生假阳性，成为ELISA非特异性显色的来源。
2、类风湿因子的干扰。在乙肝两对半的检测中，它影响E抗原的检测，造成假阳性反应。 休 闲 居 编 辑
3、84消毒液的影响。84消毒液的主要成分为有效氯，分解后的游离氯能量很高，可取代ELISA显色剂A液（TMB）上的氢（卤代反应）使其呈蓝色，当空气中84消毒液浓度大于0.001%时，即可对ELISA法的显色造成影响。而一般吸血清用的吸嘴，大多是经84消毒液浸泡消毒的，如果吸嘴冲不干净，内有残留的84消毒液，很可能会造成假阳性反应。
二、假阳性
1、钩状效应（hook effect），即随着被测物浓度增高反而显色减弱甚至不显色，造成假阴性结果。在ELISA中，只有酶抗体和待测抗原形成的复合物结合到固相抗体上后才能产生检测信号。由于因相抗体只能结合一定量的抗原，在抗原浓度过高的情况下，酶标抗体被过量的抗原所饱和，不能与固相抗体结合而被洗掉，从而导至假阴性，即钩状效应。
2、脂浊。脂浊对检测结果的干扰主要是乳糜微粒增多引起，对ELISA检测血清标志物的影响主要考虑脂浊造成血清粘度大，使分子运动速度减慢，减少抗原抗体结合的机率或由于乳糜微粒产生屏蔽效应而对测定结果产生负干扰。
3、基因突变。HBV的外衣壳沿有前S抗原（Pres），HBV Pres区的基因突变是与HBV的感染和免疫密切相关的一类突变，突变是HBV适应主C环境及抵抗宿主免疫系统所作的主要机制。ELISA检测HBV的HbsAg则可因S基因突变，表达不出HbsAg，而致假阴性。
4、Ing检不出。ELISA试剂盒内部物曾载，Ing的阳性标准品有时测不出，那么健康携带者或慢性肝炎患者的血清中含有HBV为Ing或低于Ing进以阴性结果出现也就不足为奇了。另有资料报导ELISA是间接检测体内有无存在HBV，敏感性只能达到0.1ug/ml，而用PcR方法可直接检测血液中是否存在HBV，5ul血清中含有10fg的HBV-DNA即可检出，当然PcR价格昂贵，不易普及。
三、当抗原、抗体含量处于临界水平时，呆由任何微小的不可避免的误差导致“阴性”或“阳性”二种临床意义截然相反的结果，势必影响临床乙肝的诊断和治疗，或引发某些健康体检的纠纷，对临床乙肝的诊断和药物乙肝转阴疗效观察都会带来困惑和误导。

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